Kit Transkripsi Terbalik Reagen Lab RT EASY II Untuk Menghasilkan Bahan CDNA Untai Pertama dan peralatan reagen lab

Kit transkripsi balik reagen lab yang cepat dan sangat sensitif RT EASY II untuk menghasilkan cDNA untai pertama

Aplikasi kit

Langsung digunakan untuk analisis kuantitatif PCR Real Time ekspresi gen.

Dapat dengan cepat dan akurat menganalisis jumlah jejak RNA seperti virus RNA.

Transkripsi terbalik templat RNA dengan konten GC tinggi atau struktur sekunder kompleks.

Informasi Komponen Kit

2×RT ATAU-Mudah^TMCampuran: Foregene Reverse Transcriptase, RNase Inhibitor, dNTPs, Stabilizer, Enhancer, Optimizer, dan Reverse Transcription Primer (Random Primer, Oligo(dT)₁₈Primer) dengan rasio yang dioptimalkan.

Toleransi Campuran RT

2×RT ATAU-Mudah^TMCampuran menunjukkan toleransi yang sangat tinggi terhadap alkohol dan garam guanidin setelah analisis pengujian.RNA yang dimurnikan di laboratorium sering memiliki residu alkohol dan garam guanidin, yang memiliki efek penghambatan kuat pada transkripsi balik, menghasilkan efek transkripsi balik yang tidak memuaskan atau efisiensi transkripsi balik yang rendah.Toleransi produk seri Foregene RT Easy terhadap alkohol dan garam guanidin membuat transkripsi balik lebih mudah dan efisien.

Analisis Toleransi Alkohol

Analisis toleransi garam guanidin

Persiapan sebelum operasi

Sangat disarankan agar pengguna membaca instruksi dengan seksama sebelum menggunakan kit ini.Kit seri RT Easy mudah dioperasikan, nyaman dan cepat, dan petunjuknya memberikan penggunaan yang benar dari seluruh kit.Harap siapkan bahan dan peralatan eksperimen yang diperlukan sebelum digunakan.

Jumlah RNA templat

Template RNA sebaiknya diekstraksi dari sampel segar atau disimpan pada -80 °C (pembekuan berulang dan pencairan RNA harus dihindari).

RT EasyTM II: (0,1pg-0,5μg total RNA atau 0,01pg-0,05μg mRNA)/10μl sistem.

Amplifikasi nonspesifik

1. Desain primer yang tidak masuk akal.

Rekomendasi: Desain primer sesuai dengan prinsip desain primer.

2. Residu genom.

Rekomendasi: Gunakan kit transkripsi terbalik seperti (Cat. No. RH-01031) yang berisi ablasi genom atau primer trans-intron desain.

RT-QPCR tidak ada sinyal amplifikasi

1. RNA terdegradasi.

Rekomendasi: Bahan untuk ekstraksi RNA harus sesegar mungkin, dan RNA berkualitas tinggi dan kemurnian tinggi harus digunakan.

2. RNA mengandung inhibitor.

Rekomendasi: Inhibitor transkripsi terbalik umumnya mencakup SDS, garam guanidin, EDTA, dll. Direkomendasikan untuk mencuci endapan RNA dengan etanol 70% untuk menghilangkan inhibitor.

3. Masalah desain primer.

Rekomendasi: Menurut prinsip desain primer, desain ulang primer untuk pemeriksaan.

Band target muncul di kontrol kosong

1. Kontaminasi alat operasi atau reagen.

Rekomendasi: Semua reagen atau peralatan untuk percobaan harus diautoklaf.Hati-hati dan lembut untuk mencegah sampel DNA ditarik ke dalam pipet atau tumpah keluar dari tabung centrifuge.

2. Terjadi kontaminasi selama preparasi sistem reaksi PCR.

Rekomendasi: Lakukan tindakan pencegahan yang diperlukan saat menangani, misalnya: Kenakan sarung tangan lateks, Gunakan ujung filter.Gunakan PCR Mix waktu nyata dalam sistem tahan kontaminasi.

3. Primer terdegradasi.

Rekomendasi: Gunakan elektroforesis SDS-PAGE untuk mendeteksi apakah primer terdegradasi, dan ganti dengan primer baru untuk eksperimen deteksi fluoresensi.