Lnc-RT HeroTM I(Dengan gDNase) Super Premix untuk sintesis cDNA untai pertama dari lncRNA Cat.No.RTL-09098/09099

Pahlawan Lnc-RT^TMSaya (Dengan gDNase)

Super Premix untuk sintesis cDNA untai pertama dari lncRNA

Cat.No.RTL-09098/09099

Keterangan:

Pahlawan Lnc-RT^TMI (Dengan gDNase) adalah sistem transkripsi terbalik yang khusus dikembangkan untuk lncRNA untuk menghilangkan kontaminasi DNA genom dengan cepat.5xgDNase Mix dapat dengan cepat menghapus genom yang tersisa dalam RNA pada 42°C selama 2 menit, secara efektif menghindari gangguan genom pada hasil qPCR.

5×L-RT HeroTM Mix mengandung Foregene LncRNA Reverse Transcriptase yang dikembangkan secara khusus oleh Foregene, yang merupakan tipe baru dari reverse transcriptase khusus untuk lncRNA dan templat kompleks RNA panjang lainnya, dengan afinitas RNA yang lebih kuat dan efisiensi perekaman pembalikan yang lebih tinggi.Sistem yang dioptimalkan membuat laju transkripsi terbalik lebih cepat dan dapat dengan mudah menyalin templat RNA dengan konten GC tinggi dan struktur sekunder yang kompleks.Sintesis cDNA untai pertama dapat diselesaikan pada 42°C dalam 15 menit.

Spesifikasi:

25×20μl Rxns, 50×20μl Rxns

komponen kit

Informasi komponen kit

-5×gDNase Mix: zat penghilang gDNA, perlu menggunakan reagen sesuai dengan petunjuk pengoperasian sebelum reaksi RT dilakukan (kandungan gliserol internal tidak boleh dibekukan, dan tidak boleh dibekukan, yang tergolong normal fenomena).

- 5×L-RT HEROTM MIX: Mengandung Foregene Lncrna Reverse Transcriptase, RNase Inhibitor, DNTPS, Stabilifer, Enhancer, Optimizer, Oligo (DT) 18 primer).

Fitur & keuntungan:

-Kemampuan yang efisien untuk menghapus gDNA, yang dapat menghapus gDNA dalam template dalam waktu 2 menit.

-Ini secara efisien dapat membalikkan transkripsi lncRNA.Ketika produk transkripsi balik dikenai qPCR, nilai Ct lebih rendah daripada sistem transkripsi balik konvensional.

-Sistem transkripsi balik yang efisien, hanya membutuhkan waktu 15 menit untuk menyelesaikan sintesis untai pertama cDNA.

-Templat kompleks: templat dengan konten GC tinggi dan struktur sekunder kompleks juga dapat dibalik dengan efisiensi tinggi.

-Sistem transkripsi balik sensitivitas tinggi, templat level pg juga bisa mendapatkan cDNA berkualitas tinggi.

-Sistem transkripsi balik memiliki stabilitas termal yang tinggi, suhu reaksi optimal adalah 42℃, dan masih memiliki kinerja transkripsi balik yang baik pada 50℃.

Persyaratan RNA templat

Cara terbaik adalah menggunakan RNA yang diekstraksi dari sampel segar atau diawetkan pada -80 °C.

- Integritas template: integritas yang baik, tidak ada degradasi.

- Kemurnian templat: ION, protein, EDTA, etanol, fenol, dan jurnal lain yang terkandung dalam RNA akan memengaruhi aktivitas transkriptase balik dan pada akhirnya memengaruhi efek transkripsi balik.

Dosis RNA template

- Untuk lncRNA: 10ng-1 g total RNA/20 l sistem.

- Untuk RNA umum: 0.1pg-1 g total RNA atau 0.01pg-0.1 g mRNA/20 l sistem.

Informasi komponen kit

- Campuran 5xgDNase: zat penghapus gDNA, perlu menggunakan reagen sesuai dengan petunjuk pengoperasian sebelum reaksi RT dilakukan (kandungan gliserol internal tidak boleh dibekukan, dan tidak boleh dibekukan, yang tergolong normal fenomena).

- PAHLAWAN 5×L-RT^TMMIX: Mengandung Foregene Lncrna Reverse Transcriptase, RNase Inhibitor, DNTPS, Stabilifer, Enhancer, Optimizer, Oligo (DT_{) 18}primer).

Tindakan pencegahan: (Harap baca tindakan pencegahan dengan seksama sebelum menggunakan kit)

- Template merekomendasikan menggunakan sampel segar atau RNA yang diawetkan di bawah -80 ° C (RNA harus menghindari pembekuan berulang, memastikan integritas RNA, tidak ada degradasi).

- Untuk menghindari polusi RNASE, operasi eksperimental dilakukan di ruang RNase-Free;gun head dan PCR centrifuge harus dijamin bebas RNASE;dan memakai sarung tangan dan masker sekali pakai.

- Sebelum menggunakan, 5 × GDNase Mix dan 5 × L-RT HERO^TMCAMPURAN ditempatkan di atas es membuatnya benar-benar meleleh, dan peluru ringan dicampur;sistem diformulasikan, silakan beroperasi di atas penangas es untuk meningkatkan kinerja kit, meningkatkan kinerja spesifisitas amplifikasi PCR kit.

- 5 × L-RT PAHLAWAN^TMMIX telah menambahkan primer transkripsi terbalik rasio yang dioptimalkan tanpa menambahkan primer apa pun ke primer tambahan tambahan.

- Untuk templat RNA kompleks dari struktur sekunder, suhu reaksi dapat ditingkatkan hingga 50 ° C

Alur kerja:

Penyimpanan dan Umur simpan:

ItuKit PCR Super Premixharus disimpan pada suhu -20°C.Simpan produk di lemari es bersuhu konstan pada -20°C segera setelah diterima.Jika kondisi penyimpanan sesuai, produk tidak akan menurunkan kinerja apa pun selama masa berlaku 1 tahun.

Panduan Analisis Masalah

Berikut ini adalah analisis masalah yang mungkin dihadapi dalam penggunaan kit seri Lnc-RT HeroTM I (Dengan gDNase), semoga dapat membantu eksperimen Anda.Selain itu, kami telah mendedikasikan dukungan teknis untuk membantu Anda dengan masalah eksperimental atau teknis lainnya di luar petunjuk pengoperasian dan pertanyaan.Jika Anda memiliki kebutuhan, silakan hubungi kami: 028-83361257 atau E-mail: Tech@foregene.com.

Amplifikasi non-spesifik

1. Desain primer yang tidak masuk akal

Rekomendasi: Desain primer sesuai dengan prinsip desain primer.

2. Residu genom.

Saran: Pastikan suhu reaksi penghilangan gDNA tahap pertama adalah 42°C, dan waktu reaksi juga dapat diperpanjang hingga 5 menit.

Tidak ada sinyal amplifikasi oleh RT-qPCR

1. RNA terdegradasi.

Rekomendasi: Bahan untuk ekstraksi RNA harus sesegar mungkin, dan RNA berkualitas tinggi dan kemurnian tinggi harus digunakan.

2. RNA mengandung inhibitor.

Rekomendasi: Inhibitor transkripsi balik umumnya mencakup SDS, garam guanidin, EDTA, dll. Direkomendasikan untuk mencuci endapan RNA dengan etanol 70% untuk menghilangkan inhibitor.

3. Masalah desain primer.

Rekomendasi: Menurut prinsip desain primer, desain ulang primer untuk pemeriksaan.

Band target muncul di kontrol kosong

1. Kontaminasi alat operasi atau reagen.

Rekomendasi: Semua reagen atau peralatan untuk percobaan harus diautoklaf.Hati-hati dan lembut saat menangani untuk mencegah sampel DNA tersedot ke dalam pipet atau tumpah keluar dari tabung centrifuge.

2. Kontaminasi terjadi selama preparasi sistem reaksi PCR.

Rekomendasi: Lakukan tindakan pencegahan yang diperlukan saat menangani, seperti: memakai sarung tangan lateks, menggunakan ujung filter.Gunakan Campuran PCR Waktu Nyata dalam sistem yang tahan kontaminasi.

3. Primer terdegradasi.

Saran: Gunakan elektroforesis SDS-PAGE untuk mendeteksi apakah primer terdegradasi, dan ganti dengan primer baru untuk percobaan deteksi fluoresensi.