RT-QPCR EasyTM (Satu Langkah)-Taqman Cat.No.RT-02131/02132 Campuran Master RT-PCR Waktu Nyata Satu Langkah

Cat.No.RT-02131/02132

Campuran Master RT-PCR Real-Time Satu Langkah

RT-PCR EasyTM I(Satu Langkah)

Cat.No.RT-02011/02012

Campuran Master RT-PCR satu langkah

Untuk penggunaan penelitian saja

Toko di -20℃

perkenalan produk

Produk seri Foregene One-Step RT-PCR EasyTM mewujudkan reaksi terintegrasi dari RNA ke DNA untai ganda, yaitu transkripsi balik dan amplifikasi PCR diselesaikan dalam tabung sentrifus reaksi yang sama dan sistem reaksi yang sama, yang menyederhanakan langkah-langkah eksperimental, mengoptimalkan program eksperimen, dan meningkatkan efisiensi eksperimen.

RT-qPCR MudahTM(SatuLangkah)-Taqmanmenggunakan Foregene HotStar Taq DNA Polymerase, sistem Taqman qPCR yang dioptimalkan dapat dengan cepat dan spesifik melakukan deteksi kuantitatif RT-qPCR Real Time dari templat RNA jejak.

Fitur

- Kit satu langkah memungkinkan transkripsi balik dan PCR dilakukan dalam tabung yang sama, hanya perlu menambahkan RNA templat, primer PCR spesifik, dan ddH2O Bebas RNase.

- Analisis kuantitatif real-time RNA virus atau RNA jejak dapat dilakukan dengan cepat dan akurat.

- Kit ini menggunakan reagen transkripsi terbalik Foregene yang unik dan Foregene HotStar Taq DNA Polymerase yang dikombinasikan dengan sistem reaksi unik untuk secara efektif meningkatkan efisiensi amplifikasi dan spesifisitas reaksi.

- Sistem reaksi yang dioptimalkan membuat reaksi memiliki sensitivitas deteksi yang lebih tinggi, stabilitas termal yang lebih kuat, dan toleransi yang lebih baik.

- RT-qPCR EasyTM (Satu Langkah) -Taqman kit dilengkapi dengan pewarna referensi internal ROX, yang dapat digunakan untuk menghilangkan latar belakang sinyal dan kesalahan sinyal antar sumur, yang nyaman bagi pengguna akhir untuk digunakan dalam berbagai model instrumen PCR kuantitatif

Kontrol kualitas produk

Menurut Sistem Manajemen Mutu Total FOREGEN (Sistem Manajemen Mutu Total FOREGEN), setiap batch RT-PCR Easy^TMKit I (Satu Langkah) diuji secara ketat beberapa kali untuk memastikan kualitas, keandalan, dan stabilitas setiap batch kit.

Isi Paket

Kondisi transportasi dan penyimpanan

1.Kondisi transportasi

Seluruh proses transportasi kotak es suhu rendah, untuk memastikan bahwa kit dalam keadaan <4 °C.

2. Kondisi penyimpanan

RT EasyTM I disimpan pada suhu -20°C.Simpan produk di lemari es bersuhu konstan pada -20°C segera setelah diterima.Jika kondisi penyimpanan sesuai, produk tidak akan menurunkan kinerja apa pun selama masa berlaku 1 tahun.

Informasi komponen kit

2× RT-PCR EasyTM Mix:Foregene Reverse Transcriptase, RNase Inhibitor, Foregene HotStar Taq DNA Polymerase, dNTPs, Mg2+, buffer reaksi, pengoptimal dan penstabil, dll.

Tindakan pencegahan:(Silakan baca tindakan pencegahan dengan seksama sebelum menggunakan kit)

Untuk templat, direkomendasikan untuk menggunakan RNA yang diekstraksi dari sampel segar atau disimpan pada -80℃ (RNA harus menghindari pembekuan dan pencairan berulang).

Untuk menghindari kontaminasi RNase, operasi eksperimen harus dilakukan di ruang RNase-Free;ujung pipet dan tabung sentrifus PCR yang digunakan harus bebas RNase;dan sarung tangan dan masker sekali pakai harus dipakai.Sebelum digunakan, masukkan 2×RT-PCR EasyTM Mix di atas es agar benar-benar meleleh, jentik dan aduk rata sebelum digunakan;persiapan sistem harus dioperasikan pada penangas es untuk meningkatkan kinerja kit dan spesifisitas amplifikasi PCR.

Konsentrasi RNA templat

RT-PCR EasyTM I(Satu Langkah):(0.1pg-1μg total RNA)/20μl sistem

Aplikasi Kit

- Kit ini digunakan untuk deteksi cepat gen salinan tinggi dan salinan rendah.

- Sangat cocok untuk deteksi cepat templat RNA dengan konten GC tinggi atau struktur sekunder yang kompleks.

Kontrol kualitas produk

Menurut Sistem Manajemen Mutu Total FOREGEN (Sistem Manajemen Mutu Total FOREGEN), setiap batch RT-PCR Easy^TMKit I (Satu Langkah) diuji secara ketat beberapa kali untuk memastikan kualitas, keandalan, dan stabilitas setiap batch kit.

Panduan operasi

A: Persiapan bahan dan reagen

1. Siapkan template RNA yang telah disiapkan (disarankan untuk menggunakan kit seri Foregene Total RNA Isolation Kit untuk mengekstrak dan memurnikan RNA), primer spesifik (10μM) dan bahan habis pakai serta instrumen terkait.

Catatan: Harap pastikan integritas RNA dan coba gunakan RNA yang diekstraksi dari sampel segar.

2. Tempatkan 2× RT-PCR EasyTM Mix dan RDH2O Bebas RNase di atas penangas es agar meleleh secara alami, dan jentikkan dinding tabung agar tercampur dengan baik untuk digunakan nanti.

B: Persiapan sistem RT-PCR

2×RT-PCR EasyTM Mix nyaman dan cepat digunakan, menghindari polusi selama operasi dan kesalahan eksperimental yang disebabkan oleh berbagai persiapan sistem reaksi hingga batas terbesar.Saat menggunakan, hanya setengah volume sistem reaksi (misalnya, jika sistem reaksi adalah 20μl, ambil 10μl 2×RT-PCR larutan EasyTM Mix), tambahkan jumlah template RNA dan primer spesifik yang sesuai, dan tambahkan ddH2O Bebas RNase untuk membuat volume.Lihat Tabel 1 di bawah untuk persiapan sistem reaksi RT-PCR spesifik.

Formulir 1: Persiapan sistem RT-PCR

1*: Biasanya konsentrasi akhir primer adalah 0,2-0,25μM untuk mendapatkan hasil yang lebih baik.Ketika kinerja reaksi buruk, konsentrasi primer dapat diatur dalam kisaran 0,1-0,5μM.

Catatan: Forward Primer dan Reverse Primer adalah primer spesifik untuk gen target;Sistem 50μl, silakan lihat sistem 20μl untuk menyesuaikan dosis reagen secara proporsional.

C: Pengaturan program reaksi RT-PCR

• Setelah menyiapkan sistem RT-PCR dengan mengacu pada tabel di atas, aduk perlahan (Anda dapat menggunakan ujung pipet untuk meniup dengan lembut; Anda juga dapat mencampur di vortexer dan centrifuge sebentar untuk mengumpulkan cairan yang tersebar di dinding tabung atau tutup tabung, dan letakkan di kotak es untuk digunakan nanti).

2. Lihat pengaturan program reaksi RT-PCR (Tabel 2) untuk mengatur suhu dan waktu reaksi.

Catatan: Untuk memastikan aktivitas 2xRT-PCR EasyTM Mix dan meningkatkan efisiensi amplifikasi, yang terbaik adalah menyiapkan sistem reaksi RT-PCR setelah mengatur program instrumen PCR, sehingga program reaksi dapat segera dimasukkan setelah sistem disiapkan.

Formulir 2: Pengaturan sistem reaksi RT-PCR

Catatan: Prosedur di atas hanya untuk referensi.Kondisi reaksi yang sebenarnya bervariasi tergantung pada kondisi struktural template, primer, dll. Untuk template RNA dengan struktur sekunder yang kompleks, suhu reaksi untuk langkah pertama transkripsi balik direkomendasikan pada 50 °C.Dalam operasi spesifik, perlu untuk merancang kondisi reaksi yang optimal, termasuk suhu anil, waktu ekstensi, dll. Sesuai dengan kondisi spesifik dari ukuran fragmen target, urutan dasar dari fragmen yang diperkuat, dan konten GC dan panjangnya. primer.
Diagram Operasi RT-PCR

Transkriptase Terbalik Foregene

Transkriptase balik forogen dapat memberikan reaksi transkripsi balik yang sangat efisien dan spesifik.Transkriptase balik menunjukkan afinitas tinggi dan masih mempertahankan aktivitas transkripsi balik yang baik pada suhu reaksi 50°C.Ini juga dapat membalikkan transkripsi RNA dengan struktur sekunder kompleks yang tidak dapat ditangani oleh transkriptase terbalik lainnya.Transkriptase Terbalik Forogen memiliki sensitivitas tinggi dan dapat diterapkan dalam berbagai jumlah RNA (0,1pg≤RNA≤1μg).

Foregene HotStar Taq DNA Polymerase

Memberikan amplifikasi PCR yang sangat spesifik.Ketika transkripsi balik sedang berlangsung, DNA polimerase sama sekali tidak efektif dan tidak menghalangi reaksi transkripsi balik.Setelah program reaksi PCR, dipanaskan hingga 94°C, DNA polimerase diaktifkan dan reverse transcriptase dinonaktifkan.Proses hot-start menghilangkan pembentukan primer anil non-spesifik dan dimer primer pada siklus pertama, memastikan spesifisitas dan keandalan amplifikasi PCR yang tinggi.

Peringatan:(Silakan baca tindakan pencegahan dengan seksama sebelum menggunakan kit)

- Reagen harus menghindari pembekuan dan pencairan berulang, jika tidak kinerja reagen akan menurun atau menjadi tidak valid.

- Disarankan untuk menggunakan ekstraksi sampel segar atau RNA templat yang disimpan pada -80℃ (RNA harus menghindari pembekuan dan pencairan berulang).

- Untuk menghindari kontaminasi RNase, operasi eksperimen harus dilakukan di ruang RNase-Free;ujung pipet dan tabung PCR yang digunakan harus bebas RNase;dan sarung tangan dan masker sekali pakai harus dipakai.

- Kit ini harus digunakan dengan primer khusus untuk eksperimen.Silakan pilih primer spesifik untuk gen yang akan diamplifikasi sesuai dengan kebutuhan percobaan.

- Sebelum digunakan, masukkan 2× RT-PCR Easy^TMCampur di atas es hingga benar-benar meleleh, jentik dan aduk rata sebelum digunakan;persiapan sistem harus dioperasikan pada penangas es untuk meningkatkan kinerja kit dan spesifisitas amplifikasi PCR.

- Mandi es

Reagen yang disiapkan sendiri

- template RNA

- Primer PCR spesifik gen

Keamanan

- Produk ini hanya untuk penelitian ilmiah, mohon jangan digunakan dalam pengobatan, kedokteran klinis, makanan dan kosmetik.

- Kenakan pakaian laboratorium yang sesuai, sarung tangan, kacamata pelindung, dll. saat menggunakan bahan kimia.

Kontrol negatif memiliki nilai fluoresensi yang terlalu tinggi

1. Kontaminasi reagen yang disebabkan selama operasi.

Rekomendasi: Ganti dengan reagen baru untuk percobaan RT-PCR.

2. Kontaminasi terjadi selama preparasi sistem reaksi PCR.Rekomendasi: Lakukan tindakan perlindungan yang diperlukan selama pengoperasian, seperti: mengenakan sarung tangan lateks, menggunakan ujung pipet dengan filter, dll.

3. Primer terdegradasi, dan degradasi primer akan menyebabkan amplifikasi non-spesifik.

Saran: Gunakan elektroforesis SDS-PAGE untuk mendeteksi apakah primer terdegradasi, dan menggantinya dengan primer baru untuk percobaan RT-PCR.

Pengulangan nilai kuantitatif yang buruk

1. Instrumen tidak berfungsi.

Saran: Mungkin ada kesalahan antara setiap lubang PCR dari mesin PCR, yang mengakibatkan reproduktifitas yang buruk selama manajemen suhu atau deteksi.

Silakan lakukan tes sesuai dengan instruksi dari instrumen yang sesuai.

2. Kemurnian sampel tidak baik.

Rekomendasi: Sampel yang tidak murni akan menyebabkan reproduktifitas eksperimen yang buruk, yang mencakup kemurnian template dan primer.Yang terbaik adalah memurnikan ulang template, dan primer paling baik dimurnikan dengan SDS-PAGE.

3. Waktu persiapan dan penyimpanan sistem PCR terlalu lama.

Saran: Gunakan sistem RT-PCR untuk percobaan PCR segera setelah persiapan, dan jangan biarkan terlalu lama;disarankan untuk menyiapkan program PCR sebelum melanjutkan dengan persiapan sistem RT-PCR.

4. Kondisi amplifikasi PCR tidak sesuai, dan urutan atau konsentrasi primer tidak tepat.

Saran: konfirmasi kebenaran urutan primer dan primer belum terdegradasi;ketika sinyal amplifikasi tidak bagus, coba sesuaikan suhu annealing dan sesuaikan konsentrasi primer dengan tepat.