Transkriptase Terbalik M-MLV Foreasy
Foreasy Generasi Baru M-MLV Reverse Transcriptase RT Enzyme Foreasy Dijual
perkenalan produk
Foreasy M-MLV Reverse Transcriptase adalah reverse transcriptase baru yang diekspresikan dalam bakteri rekayasa E. coli menggunakan teknologi rekombinasi genetik.Ini adalah DNA polimerase rekombinan yang mensintesis untai DNA komplementer dari RNA untai tunggal, DNA, atau hibrida RNA:DNA.Ia tidak memiliki aktivitas RNase H, stabilitas yang kuat, afinitas RNA yang kuat, dan sensitivitas deteksi yang tinggi.
Komponen produk:
| Komponen |
IM-02011 |
IM-02012 |
IM-02013 |
|
Transkriptase Terbalik Foreasy
(200 U/μL)
|
200 KU (1 mL) |
2000 KU (10 mL) |
5000 KU (25 mL) |
|
5 × Mudah
Penyangga RT
|
1 mL × 5 |
10 mL × 5 |
10mL ×12 |
Jenis
| Kucing No. |
Jenis |
| IM-02011 |
200 KU |
200 U/μL |
| IM-02012 |
2.000 KU |
200 U/μL |
| IM-02013 |
5.000 KU |
200 U/μL |
Penyimpanan
Simpan pada -20±5℃ selama 2 tahun atau pada -80℃ untuk penyimpanan jangka panjang.
Aplikasi
u Sintesis untai pertama cDNA untuk RT-PCR dan RT-PCR waktu nyata
u sintesis cDNA untuk kloning dan ekspresi.
u Generasi probe cDNA berlabel untuk microarrays.
u Analisis RNA ekstensi primer
Definisi satuan
Satu unit M-MLV RT adalah jumlah enzim yang dibutuhkan untuk menggabungkan 1 nmol [3H] dTTP dalam 10 menit pada 37°C menggunakan poli(A)oligo(dT)25 sebagai template-primer.
Kondisi reaksi satuan
50 mM Tris-HCl (pH 8,3), 40 mM KCl, 6 mM MgCl2, 1 mM DTT, 0,5 mM [3H]dTTP, 0,1 mM poli(A), 0,1 mM oligo(dT)25, 0,1 mg/mL BSA, dan enzim dalam 50 L selama 10 menit pada 37°C.
Operasi :
mensintesis untai pertama cDNA (sistem reaksi 20 L)
1. Struktur sistem RT (langkah-langkah berikut harus dilakukan di atas es).
1.1 Setelah mencairkan setiap komponen, tambahkan ke tabung reaksi dengan urutan sebagai berikut Tabel 1
Tabel 1:
|
Sistem RT menambahkan konten
|
Volume |
Konsentrasi akhir
|
| RNA template |
X L |
Total RNA:<5 g / mRNA:<0,5 g |
| Primer Acak |
0,5 g |
100 pmol |
| Atau Oligo(dT)18 Primer |
0,2 g |
100 pmol |
| Atau Primer Tertentu |
15-20 malam |
15-20 malam |
| RDH2O bebas RNase |
menjadi 12,5 L |
1.2 Setelah sistem disiapkan, aduk perlahan dan sentrifugasi sebentar, kemudian lakukan reaksi RT sesuai tabel di bawah ini
Meja 2
| Melangkah |
Suhu |
Waktu |
Isi |
| 1 |
65℃ |
5 menit |
Denaturasi |
| Dinginkan dengan cepat di atas es setelah menyelesaikan reaksi |
| |
- Menambahkan Reaktan dalam urutan sebagai tabel berikut 3 setelah dingin di atas es
Tabel:3:
|
Sistem RT menambahkan konten
|
Volume |
Konsentrasi akhir
|
| 5× Penyangga RT Foreasy |
4 L |
1× |
| Foreasy RNase Inhibitor (40 U/µL) |
0,5 L |
1 U/μL |
| dNTP Campuran (masing-masing 10 mM) |
2 L |
1 mM |
| Transkriptase Terbalik Foreasy (200 U/µL) |
1 L |
10 U/μL |
1.4 Setelah sistem disiapkan, aduk perlahan dan sentrifus sebentar, kemudian lakukan kondisi reaksi RT pada Tabel 4 berikut
Tabel 4:
| Melangkah |
Suhu |
Waktu |
Isi |
| 1 |
42℃ |
50 menit |
cDNAsintesis |
| 2 |
70 |
10 menit |
Transkriptase balik yang tidak aktif |
| 3 |
4℃ |
T/A |
Tempatkan pada suhu 4°C untuk digunakan nanti atau simpan pada suhu -20°C setelah reaksi |
Catatan: Saat menggunakan Random Primer, reaksi harus dipanaskan terlebih dahulu pada suhu 25°C selama 10 menit sebelum reaksi tahap pertama.
Prosedur di atas hanya untuk referensi, dan kondisi reaksi yang sebenarnya bervariasi tergantung pada struktur template, primer, dll.
Setelah reaksi selesai, produk reaksi ditempatkan di atas es untuk percobaan selanjutnya secara langsung;untuk penyimpanan jangka panjang, harap simpan pada suhu -20 °C atau -80 °C.
Pesan Anda harus antara 20-3.000 karakter!
