RT-PCR EasyTM II Dua Langkah Cat.No.RT-02021/02022 Dua Langkah RT PCR Master Mix Kit PCR

RT-PCR EasyTM II(Dua Langkah) Cat.No.RT-02021/02022 Kit PCR Master Mix RT-PCR Dua Langkah

RT-PCR Mudah^TM II(Dua langkah)

Cat.No.RT-02021/02022

Campuran Master RT-PCR dua langkah

RT-PCR EasyTM II(Dua Langkah)

Cat.No.RT-02021/02022

Campuran Master RT-PCR dua langkah

Untuk penggunaan penelitian saja

Toko di -20℃

perkenalan produk

RT-PCR EasyTM II(Two Step) berisi semua reagen untuk RT-PCR dua langkah, menggabungkan reaksi RT dan reaksi PCR dalam kit yang sama, menyediakan RT Mix dan PCR Mix yang dioptimalkan.RT Mix yang unik dapat mensintesis cDNA untai pertama berkualitas tinggi dengan mudah dan efisien.2× PCR EasyTM Mix Plus memiliki efisiensi tinggi dan amplifikasi spesifik.Kombinasi organik keduanya membuat deteksi gen target lebih sensitif.

Fitur

Analisis kuantitatif RNA real-time dapat dilakukan dengan cepat dan akurat.

Kit ini menggunakan reagen transkripsi terbalik Foregene yang unik dan Foregene HotStar Taq DNA Polymerase yang dikombinasikan dengan sistem reaksi unik untuk secara efektif meningkatkan efisiensi amplifikasi dan spesifisitas reaksi.

Sistem reaksi yang dioptimalkan membuat reaksi memiliki sensitivitas deteksi yang lebih tinggi, stabilitas termal yang lebih kuat, dan toleransi yang lebih baik.

Isi Paket

Kondisi transportasi dan penyimpanan

1. Kondisi transportasi

Seluruh proses transportasi kotak es suhu rendah, untuk memastikan bahwa kit dalam keadaan <4 °C.

2. Kondisi penyimpanan

Disimpan pada -20°C.Simpan produk di lemari es bersuhu konstan pada -20°C segera setelah diterima.Jika kondisi penyimpanan sesuai, produk tidak akan menurunkan kinerja apa pun selama masa berlaku 1 tahun.

Informasi komponen kit

2× RT EasyTM Mix:Foregene Reverse Transcriptase, RNase Inhibitor, dNTPs, buffer reaksi, pengoptimal dan penstabil, dll.

2× PCR EasyTM Mix Plus :Foregene Taq DNA Polymerase, dNTPs, Mg2+, buffer reaksi, pengoptimal dan penstabil.

Tindakan pencegahan: (Harap baca tindakan pencegahan dengan seksama sebelum menggunakan kit)

Reagen harus menghindari pembekuan dan pencairan berulang, jika tidak kinerja reagen akan menurun atau menjadi tidak valid.

Untuk templat, direkomendasikan untuk menggunakan RNA yang diekstraksi dari sampel segar atau disimpan pada -80℃ (RNA harus menghindari pembekuan dan pencairan berulang).

Untuk menghindari kontaminasi RNase, operasi eksperimen harus dilakukan di ruang RNase-Free;ujung pipet dan tabung sentrifus PCR yang digunakan harus bebas RNase;dan sarung tangan dan masker sekali pakai harus dipakai.

Kit ini harus digunakan dengan primer khusus untuk eksperimen.Silakan pilih primer spesifik untuk gen yang akan diamplifikasi sesuai dengan kebutuhan percobaan.

Sebelum digunakan, masukkan 2×RT EasyTM Mix dan 2×PCR EasyTM Mix Plus di atas es agar benar-benar meleleh, jentik dan aduk rata sebelum digunakan;persiapan sistem harus dioperasikan pada penangas es untuk meningkatkan kinerja kit dan meningkatkan Spesifisitas amplifikasi PCR.

Tindakan pencegahan:(Silakan baca tindakan pencegahan dengan seksama sebelum menggunakan kit)

- Reagen harus menghindari pembekuan dan pencairan berulang, jika tidak kinerja reagen akan menurun atau menjadi tidak valid.

- Untuk templat, direkomendasikan untuk menggunakan RNA yang diekstraksi dari sampel segar atau disimpan pada -80℃ (RNA harus menghindari pembekuan dan pencairan berulang).

- Untuk menghindari kontaminasi RNase, operasi eksperimen harus dilakukan di ruang RNase-Free;ujung pipet dan tabung sentrifus PCR yang digunakan harus bebas RNase;dan sarung tangan dan masker sekali pakai harus dipakai.

- Kit ini harus digunakan dengan primer khusus untuk eksperimen.Silakan pilih primer spesifik untuk gen yang akan diamplifikasi sesuai dengan kebutuhan percobaan.

- Sebelum digunakan, masukkan 2×RT Easy^TMCampur dan 2 × PCR Mudah^TMCampur Plus di atas es hingga benar-benar meleleh, jentik dan aduk rata sebelum digunakan;persiapan sistem harus dioperasikan pada penangas es untuk meningkatkan kinerja kit dan meningkatkan Spesifisitas amplifikasi PCR.

Konsentrasi RNA templat

RT-PCR EasyTM II(Dua Langkah):(0.1pg-5μg total RNA)/20μl sistem

Panduan operasi

A-1: Persiapan bahan dan reagen

1. Siapkan template RNA yang telah disiapkan (disarankan untuk menggunakan kit seri Foregene Total RNA Isolation Kit untuk mengekstrak dan memurnikan RNA), primer spesifik (10μM) dan bahan habis pakai serta instrumen terkait.

Catatan: Harap pastikan integritas RNA dan coba gunakan RNA yang diekstraksi dari sampel segar.

2. Letakkan 2×RT EasyTM Mix dan ddH2O Bebas RNase di atas penangas es agar mencair secara alami, dan jentikkan dinding tabung agar tercampur dengan baik untuk digunakan nanti.

A-2: Persiapan sistem RT

2× RT EasyTM Mix nyaman dan cepat digunakan, menghindari polusi selama operasi dan kesalahan eksperimental yang disebabkan oleh berbagai persiapan sistem reaksi hingga batas terbesar.Saat menggunakan, cukup ambil setengah volume sistem reaksi (misalnya, jika sistem reaksi adalah 20μl, ambil 10μl 2×RT EasyTM Mix solution), tambahkan template RNA dan primer transkripsi balik, dan tambahkan ddH2O Bebas RNase untuk membuat volumenya menjadi 20μl.Persiapan sistem reaksi RT spesifik dapat mengacu pada Tabel 1 di bawah ini.

Formulir 1: Persiapan sistem RT

A-3: Pengaturan program reaksi RT

1. Setelah menyiapkan sistem RT dengan mengacu pada tabel di atas, aduk perlahan (Anda dapat menggunakan ujung pipet untuk meniup dengan lembut; Anda juga dapat mencampurnya pada vortexer dan centrifuge untuk mengumpulkan cairan yang tersebar di dinding tabung atau tutup tabung , dan letakkan di Ready to use on ice box).

2. Lihat pengaturan program reaksi RT (Tabel 2) untuk mengatur suhu, waktu, dll.

Catatan: Untuk memastikan aktivitas Mix dan meningkatkan efisiensi amplifikasinya, yang terbaik adalah menyiapkan sistem reaksi RT setelah rendaman logam mencapai suhu reaksi yang disetel (suhu transkripsi terbalik 42℃ atau 50℃), sehingga sistem dapat disiapkan segera setelah selesainya persiapan sistem.Masuk ke program reaksi.Reaksi RT juga dapat dilakukan pada mesin PCR.

Formulir 2: Pengaturan program reaksi RT

Catatan: Saat menggunakan primer Acak, reaksi harus dipanaskan terlebih dahulu pada 25 selama 10 menit sebelum langkah pertama reaksi.Prosedur di atas hanya untuk referensi.Kondisi reaksi yang sebenarnya bervariasi tergantung pada kondisi struktural template, primer, dll. Untuk template RNA dengan hasil sekunder yang kompleks, suhu reaksi pertama direkomendasikan adalah 50℃.

1. Produk reaksi dapat langsung digunakan dalam pengujian berikutnya, atau disimpan pada suhu -20°C hingga satu minggu.Untuk penyimpanan jangka panjang, dianjurkan untuk menghindari pembekuan dan pencairan berulang pada -80 °C.

B: Reaksi identifikasi PCR

B-1: Persiapan sistem reaksi PCR

Gunakan cDNA yang disintesis pada langkah A sebagai templat, dan lakukan reaksi PCR dengan 2xPCR EasyTM Mix Plus yang disediakan dalam kit.Tempatkan 2×PCR EasyTM Mix Plus, cDNA, dan ddH2O Bebas RNase di atas penangas es agar meleleh secara alami, dan jentikkan dinding tabung agar tercampur hingga digunakan.Untuk persiapan sistem PCR spesifik, lihat Tabel 3 di bawah ini.

Formulir 3: Persiapan sistem reaksi PCR反应体系配制

1*: Biasanya konsentrasi akhir primer adalah 0,2-0,25μM untuk mendapatkan hasil yang lebih baik.Ketika kinerja reaksi buruk, konsentrasi primer dapat diatur dalam kisaran 0,1-0,5μM.

B-2: Pengaturan kondisi reaksi PCR

1. Setelah menyiapkan sistem PCR dengan mengacu pada tabel di atas, aduk perlahan (Anda dapat menggunakan ujung pipet untuk meniup dengan lembut; Anda juga dapat mencampurkannya pada vortexer dan centrifuge untuk mengumpulkan cairan yang tersebar di dinding tabung atau tutup tabung , dan letakkan di Ready to use on ice box).

2. Lihat pengaturan program reaksi PCR (Tabel 4) untuk mengatur suhu dan waktu reaksi.

Catatan: Untuk memastikan aktivitas Campuran PCR dan meningkatkan efisiensi amplifikasi, yang terbaik adalah mengatur kondisi PCR pada mesin PCR sebelum menyiapkan sistem PCR.

Formulir 4: Pengaturan kondisi reaksi PCR

1*: Tetapkan waktu tertentu sesuai dengan panjang fragmen target yang diperkuat.Kecepatan amplifikasi Foregene Taq DNA Polymerase adalah 2kb/menit.

Catatan: Kondisi reaksi PCR bervariasi tergantung pada kondisi struktural template, primer, dll. Untuk template RNA dengan struktur sekunder yang kompleks, direkomendasikan bahwa suhu reaksi untuk langkah pertama transkripsi balik adalah 50°C.Dalam operasi tertentu, perlu untuk merancang kondisi reaksi yang optimal, termasuk suhu anil, waktu ekstensi, dll., Sesuai dengan kondisi spesifik seperti ukuran fragmen target, urutan dasar fragmen yang diperkuat, dan konten GC dan panjang primernya.

Diagram Operasi RT-PCR