Pada 12 Oktober 2021, tim Zhou Xi dari Institut Virologi Wuhan/Laboratorium Virologi Kunci Negara, Akademi Ilmu Pengetahuan Tiongkok dan Tim Lulu dari Kementerian Pendidikan Virologi Molekuler Medis/Laboratorium Utama Komisi Kesehatan dan Kesehatan Universitas Fudan bersama-sama menerbitkan dalam majalah "Immunity" berjudul Makalah penelitian "Penghambatan penekan virus protein RNAi oleh desainerpeptida melindungi dari infeksi enteroviral in vivo" mengungkapkan untuk pertama kalinya bahwa desain rasional penghambat polipeptida untuk secara khusus menargetkan penekan RNAi enterovirus dapat secara efektif mematahkan efek VSR dari virus.Penghambatan RNAi sepenuhnya melepaskan fungsi kekebalan antivirus RNAi, yang merupakan bukti kuat bahwa mekanisme kekebalan RNAi masih ada pada mamalia.Karena aktivitas antivirus yang baik dan keamanan tinggi yang ditunjukkan oleh mekanisme kekebalan ini pada sel dan hewan, potensinya untuk pengembangan klinis sangat tinggi.
kekebalaneperang: kedua belah pihak berpartisipasi dalam perang kapan saja, medan perang dengan cara yang sering
Sejak awal kehidupan, itu bukan halo dan saya yang baik, tetapi medan perang yang kejam dari hidup dan mati Anda.Entah Anda keluar dari wilayah saya atau Anda tinggal dan menjadi bagian dari saya.
Dari duri skala makro, tanduk, cakar, dan gigi, hingga fagositosis, pembubaran, dan keracunan pada tingkat sel, hingga pemotongan, gangguan, dan degradasi struktur molekul;dari in vitro ke in vivo, dari ekstraseluler ke intraseluler: Selamat datang di Difen Pertempuran hidup dan mati—pertempuran kekebalan yang dimulai kapan saja.
RNAi - mekanisme kekebalan antivirus alami dan efisien
Dalam perang tanpa batas ini, ada mekanisme kekebalan alami (bisnis utama mengatur ekspresi gen, dan bisnis sampingan melawan invasi virus), efisien, stabil, dan ada di mana-mana (sangat terpelihara) - RNAi (gangguan RNA), yang dianggap sebagai dalam Fungsi antivirus yang paling penting pada jamur, tumbuhan dan invertebrata.Singkatnya, RNA untai ganda (dsRNA) yang dihasilkan oleh replikasi virus dikenali oleh protein Dicer jalur RNAi dan dipecah menjadi RNA pengganggu kecil yang diturunkan dari virus (siRNA virus, vsiRNA), dan kemudian dirakit menjadi kompleks pembungkaman yang diinduksi RNA ( kompleks pembungkaman yang diinduksi RNA).kompleks, RISC), sehingga menargetkan degradasi RNA virus.Sejalan dengan itu, sebagian besar virus juga telah mengembangkan mekanisme antagonis yang sesuai, yaitu, untuk menghindari kekebalan antivirus RNAi dengan mengkodekan penekan RNAi virus (Viral Suppressor of RNAi, VSR).
Penemuan mekanisme kekebalan RNAi pada mamalia
Namun, karena vsiRNA yang dibentuk oleh pembelahan RNA virus belum ditemukan dalam sel mamalia, mekanisme kekebalan RNAi dianggap sebagai "peninggalan evolusi" yang ditinggalkan setelah mamalia mengembangkan mekanisme antivirus lainnya.Namun, sejak 2017, sejumlah penelitian terkait telah menemukan berbagai VSR yang berasal dari virus, menegaskan bahwa mekanisme kekebalan RNAi tidak hilang pada sel mamalia, tetapi dihambat oleh virus.Pada saat yang sama, dengan penemuan protein VSR yang dikodekan oleh berbagai virus manusia yang penting, mekanisme molekuler antagonisme jalur RNAi telah terungkap.
Peptida bertarget VSR: arah baru untuk pengembangan obat
Dalam studi ini, tim peneliti secara inovatif merancang dua peptida penargetan VSR (peptida penargetan VSR, VTP), P1 dan P2, berdasarkan urutan heliks A1 dan A2 dari protein VSR enterovirus EV-A713A.Dengan mendeteksi akumulasi EV-A71 RNA dalam garis sel yang dipilih, ditunjukkan bahwa P1 dan P2 secara efektif menghambat replikasi virus dengan cara yang bergantung pada dosis.
Kemudian, menurut hasil eksperimen, serangkaian peptida disintesis lebih lanjut dengan mengacu pada urutan P2 dengan efek yang lebih baik, dan ditemukan bahwa isoform modifikasi transkripsi-transformasi D-balik (ER-DRI) dari peptida ER memiliki efek penghambatan terbaik pada replikasi RNA virus.Untuk mengonfirmasi bahwa rangkaian VTP ini menargetkan dan menonaktifkan EV-A71 3AVSR dan membuka kunci aktivitas antivirus RNAi, total RNA dari sel yang terinfeksi diekstraksi dan diurutkan secara mendalam.Hasilnya menunjukkan bahwa vsiRNA yang terdeteksi memang berasal dari EV-A71.Diantaranya, pemurnian dan ekstraksi RNA virus EV-A71 dalam sel yang terinfeksi dilakukan menggunakan Qiagen danAsalVirusRNAKit Isolasi.(Kit ini menggunakan kolom spin dan formula yang dikembangkan oleh Foregene, yang dapat secara efisien mengekstrak RNA virus dengan kemurnian tinggi dan kualitas tinggi dari sampel seperti plasma, serum, cairan tubuh bebas sel, dan kultur sel
supernatan.Kit ini secara khusus menambahkan Linear Acrylamide, yang dapat dengan mudah menangkap sejumlah kecil RNA dari sampel.Kolom RNA-Only dapat secara efisien mengikat RNA.Kit ini dapat memproses sejumlah besar sampel secara bersamaan.
Seluruh kit tidak mengandung RNase, sehingga RNA yang dimurnikan tidak akan terdegradasi.Buffer viRW1 dan Buffer viRW2 dapat memastikan bahwa asam nukleat virus yang diperoleh bebas dari protein, nuklease atau kotoran lainnya, yang dapat digunakan secara langsung untuk eksperimen biologi molekuler hilir.)
Kit Isolasi RNA Vrial
Pada saat yang sama, VTP tidak dapat memberikan efek antivirus pada virus EV-A71 dengan mutasi dan penghapusan fungsi 3A-VSR, serta pada sel yang kekurangan Dicer1 atau AGO2 yang terinfeksi virus EV-A71.Terbukti bahwa mekanisme kerjanya memang menargetkan 3A-VSR dan bergantung pada jalur RNAi.
Untuk menyelidiki potensi praklinis ER-DRI, tim peneliti mengevaluasi efek antivirusnya pada tikus yang terinfeksi virus EV-A71 dengan injeksi peptida berlabel fluoresen intraperitoneal.Hasil penelitian menunjukkan bahwa ER-DRI juga merangsang respon imun antivirus RNAi pada mencit, menghambat replikasi EV-A71, memperbaiki gejala klinis mencit yang terinfeksi, dan mengurangi kematian mencit akibat infeksi.Pada saat yang sama, uji toksisitas akut menunjukkan bahwa ER-DRI tidak membahayakan kesehatan tikus.
Mekanisme kekebalan RNAi yang dibuka oleh VTP cukup kuat untuk memediasi aktivitas antivirus yang efisien, dengan jelas menunjukkan pentingnya fisiologis dan kelayakan terapeutik RNAi sebagai kekebalan antivirus pada mamalia.Selain itu, penelitian ini telah menunjukkan bahwa VSR adalah target yang dapat dibius, memberikan strategi baru untuk menargetkan VSR untuk terapi antivirus, dan peptida seperti ER-DRI sangat menjanjikan sebagai VTD kelas satu untuk infeksi enterovirus.
Tautan Artikel:Penghambatan penekan virus protein RNAi oleh peptida perancang melindungi dari infeksi enteroviral in vivo - PubMed (nih.gov)
Tautan Produk:Kit Isolasi RNA Virus
Pesan Anda harus antara 20-3.000 karakter!
