Enzim Taq hot-start banyak digunakan.Dibandingkan dengan DNA polimerase biasa, enzim Taq hot-start dapat secara efektif menghindari beberapa amplifikasi non-spesifik dan pembentukan dimer primer, dan secara efektif dapat meningkatkan tingkat keberhasilan amplifikasi gen target.Khususnya di bidang pengujian genetik, enzim Taq hot-start telah diidentifikasi sebagai standar wajib di industri, dan DNA polimerase biasa tidak boleh digunakan.Seperti dapat dilihat dari atas, enzim Taq hot-start banyak digunakan.Saat ini sudah banyak merek enzim Taq hot-start di pasaran dalam negeri, tetapi enzim Taq hot-start yang berkualitas tinggi tidak banyak.Dihadapkan dengan begitu banyak produk enzim Taq hot-start, bagaimana kita harus memilih?
1. Pilih enzim Taq hot-start dengan efisiensi amplifikasi tinggi
Efisiensi amplifikasi PCR erat kaitannya dengan kinerja enzim Taq.Setelah sistem reaksi enzim Taq yang baik dioptimalkan, efisiensi amplifikasi di atas 95%, dan rentang amplifikasi jumlah template awal lebar.Amplifikasi yang memuaskan dapat diperoleh ketika kandungan gen target rendah, dan tidak mudah diracuni ketika jumlah template tinggi, dan periode amplifikasi eksponensial panjang.Untuk enzim Taq dengan kinerja yang buruk, bahkan jika sistem reaksi telah dioptimalkan berkali-kali, efisiensi amplifikasi masih kurang dari 90%, bentuk "S" dari kurva amplifikasi tidak jelas, kemiringannya kecil, dan kurvanya datar.Ketika jumlah templat rendah, itu tidak dapat diperkuat, dan ketika jumlah templat tinggi, efek amplifikasi tidak ideal.Oleh karena itu, pemilihan DNA polimerase dengan efisiensi amplifikasi tinggi sangat penting untuk keberhasilan PCR dan qPCR.
2. Pilih enzim Taq hot-start dengan kekuatan enzim yang kuat
Kekuatan enzimatik dari enzim Taq berhubungan dengan efisiensi amplifikasi.Umumnya, semakin kuat daya enzimatik dari enzim Taq hot-start, semakin lama periode pertumbuhan eksponensial amplifikasi PCR, kurva 'berbentuk S' yang lebih khas, semakin tinggi nilai sinyal fluoresensi, dan semakin cocok untuk deteksi PCR multipleks. .Polimerase DNA merek dengan kekuatan enzimatik yang lemah umumnya hanya dapat mendukung reaksi 2-pleks.Saat melakukan reaksi 3-pleks, kurva amplifikasinya rendah, nilai sinyal fluoresensinya rendah, dan tidak ada kurva amplifikasi yang khas, sehingga hasilnya sulit untuk dinilai.
3. Pilih enzim Taq hot-start dengan sensitivitas tinggi
Secara umum, DNA polimerase memiliki efisiensi amplifikasi tinggi dan sensitivitas tinggi, tetapi ada juga inkonsistensi.Jika kelimpahan gen target sampel yang akan diamplifikasi rendah, direkomendasikan untuk menguji sensitivitas amplifikasi enzim Taq.Metode deteksi yang paling umum adalah dengan melakukan pengenceran gradien 10 kali lipat atau 5 kali lipat dari fragmen plasmid gen target, melakukan deteksi PCR pada pengenceran yang lebih rendah, dan memilih enzim Taq hot-start dengan sensitivitas deteksi yang lebih tinggi.
Dapat dilihat dari hal di atas bahwa peneliti perlu memilih sesuai dengan persyaratan eksperimen dan kondisi pendanaan mereka sendiri.Yang terbaik adalah melakukan eksperimen amplifikasi pengenceran gradien untuk mendeteksi efisiensi amplifikasi dan sensitivitas enzim Taq hot-start.
Contoh Foregene's Taq DNA Polimerase:
Foreasy HS Taq DNA Polimerase
Keterangan
Foreasy HS Taq DNA Polymerase adalah DNA polimerase yang diekspresikan pada bakteri rekayasa Escherichia coli dengan teknologi rekombinasi gen.Enzim digabungkan dengan penyangga reaksi yang unik, yang membuat produk sangat tahan dan kompatibel, dan dapat langsung menggunakan sampel lisat (sistem Foregene Lysis) sebagai cetakan untuk reaksi deteksi.
Aplikasi
PCR kualitatif dan deteksi PCR kuantitatif dari templat yang dimurnikan dan templat yang tidak dimurnikan.
Kontrol kualitas
1. Tidak ada aktivitas nuklease eksogen yang terdeteksi
2. Metode PCR untuk mendeteksi DNA genom residu tanpa inang
3. Secara efektif dapat memperkuat gen salinan tunggal dalam Genom manusia
4.Simpan pada suhu kamar selama seminggu, tidak ada perubahan aktivitas
Pesan Anda harus antara 20-3.000 karakter!
